Phương pháp lọc Sephadex G-50

v   Nồng độ của tác nhân kếtĐể có thêm thông tin về các dịch vụ nâng ngực, nâng mũi, vá màng trinh, thẩm mỹ vùng kín, thẩm mỹ môi, thẩm mỹ mắt, thẩm mỹ khuôn mặt, thu hẹp âm đạo…  và được tư vấn cụ thể về các dịch vụ xin quý khách hàng liên hệ tại đây.

v   pH của dịch chiết

v   Nhiệt độ kết tủa

v   Thời gian tiếp xúc của tác nhân và dịch chiết

          Ngoài ra, ta còn sử dụng ammonium sulfate. Sự kết tủa với tác nhân này là một quá trình thuận nghịch và có thể thực hiện ở nhiệt độ thường. Do có những ưu điểm như vậy nên tác nhân ammonium sulfate thường được dùng để kết tủa bromelain thu về chế phẩm enzyme thô.

- Hiện nay người ta kết tủa enzyme bromelain bằng CMC (carboxyl methyl cellulose) do enzyme thu được có độ tinh khiết cao, thời gian đợi kết tủa ngắn và tiến hành thuận lợi hơn.

- Quá trình tạo ra CMC ^[4]:

	NaOH

(CMC)

Vải màn                   Alkalicellulose                          

- Quy trình thu nhận enzyme Bromelain.

Hình 3.5: Quy trình thu nhận enzyme Bromelain

Mô tả sơ đồ :

Thân, chồi và quả của trái dứa sẽ được rửa sạch sau đó tiến hành đem xay nhuyễn những phần đó thu được hệ huyền phù. Đem lọc sẽ thu được dịch ép, sau đó ly tâm với tốc độ 6000 vòng/phút trong 15 phút sẽ thu được dịch ly tâm, khi đó sẽ cho tác nhân kết tủa (acetone tinh khiết -20°C, ethanol -4°C hoặc ammonium sulfate 70% bão hòa) vào dung dịch trên để làm kết tủa enzyme Bromelain với thời gian 30 phút rồi tiến hành ly tâm lạnh 6000 vòng/phút trong 20 phút thu được kết tủa enzyme này cuối cùng đem sấy đông khô sẽ được enzyme Bromelain thô.

3.1.3 Phương pháp hấp phụ

Có nhiều chất được sử dụng để làm chất hấp phụ enzyme như kaolin hay bentonite để hấp phụ bromelain. Kaolin là một chất có tính hấp phụ tốt, kích thước hạt nhỏ hơn 1µm do đó diện tích tiếp xúc giữa hạt kaolin và chất bị hấp phụ tăng lên rất nhiều. Một lí do khác dẫn đến khả năng hấp phụ vật chất của kaolin cao là do trên bề mặt kaolin có rất nhiều ion OH^- và O^2-, những ion này có khả năng liên kết tương đối bền vững với chất bị hấp phụ.

Hình 3.6: Cấu tạo của kaolin

3.2 Các phương pháp tinh sạch enzyme Bromelain

3.2.1 Phương pháp thẩm tích

Tiến hành:

- Cân 1g enzyme thô.

- Dung dịch đệm sử dụng là 10ml dung dịch Na₃PO₄ 0,03M có pH = 7.2.

- Cho protein vào túi cellophane rồi tiến hành thẩm tích trong 6h và cứ sau 2h thay thế dung dịch đệm bên ngoài 1 lần. Dung dịch đệm phía ngoài túi được khuấy liên tục bằng 1 máy khuấy từ, cuối cùng thu được enzyme trong túi.

3.2.2 Phương pháp lọc Sephadex G-50Để có thêm thông tin về các dịch vụ nâng ngực, nâng mũi, vá màng trinh, thẩm mỹ vùng kín, thẩm mỹ môi, thẩm mỹ mắt, thẩm mỹ khuôn mặt, thu hẹp âm đạo…  và được tư vấn cụ thể về các dịch vụ xin quý khách hàng liên hệ tại đây.rong 7 phút. Loại bỏ 5ml đầu tiên rồi mới bắt đầu thu dịch enzyme. Dịch enzyme được thu đến khi dùng Ba(NO₃)₂ để thử (NH₄)₂SO₄ và thấy có xuất hiện kết